草莓的脱毒苗培育技术

    1. 热处理
    盆栽草莓种苗用塑料薄膜保持相对湿度50%～70%，置温室抚育30～60天后根据需要脱除病毒种类，选用不同的处理方法。斑驳病毒需38℃恒温处理12～15天；轻型黄边病毒和皱缩病毒需38℃恒温处理20天以上。镶脉病毒的耐热性较强，热处理不易脱除。
    2. 茎尖脱毒
    在生长季节(最好是8月份)取田间生长健壮的匍匐茎4～5厘米长，先用1%的洗衣粉水刷洗表面污物即绒毛，再用流水冲洗1小时后，在超净工作台上将材料截成2～3厘米长段，用70%的酒精浸泡30s、10%次氯酸钙或0.1%升汞消毒15～20分钟，无菌水冲洗3～5次，然后，将材料置于无菌培养皿中，在解剖镜下取0.2厘米长，带1～2个叶原基的茎尖。再将茎尖置MS＋0.1毫克/升(IBA)＋0.5毫克/升(6～BA)＋0.2毫克/升(GA3)(pH5.8)的分化培养基中，在25±＋1)℃、1500～2000勒克斯光强、10～12小时/天光照下培养。茎尖在分化培养基中培养20～30天后，即开始新芽分化。新芽经3～4次转接(继代)后，即可以长成2～3厘米的无根试管苗。最后取2～3厘米的无根试管苗置MS或1/2MS培养基中、或MS＋0.2毫克/升(IAA)或(IBA)＋3克/升(AC)(pH5.8)中诱导生根。生根苗炼苗7～10天后便可以移栽至腐殖质含量高的基质中，用MS培养液体浇透培养基，并用塑料薄膜或大烧杯罩上后置于温室内培育。
    3. 花药培养
    于春季草莓现蕾时，取发育为单核的花蕾(花蕾直径4毫米左右、花冠未松动、花粉直径1毫米左右)，用流水冲洗0.5小时后，在超净工作台上(无菌条件下)用70%酒精浸泡30秒、10%次氯酸钙或0.1%小时克Cl2消毒15～20分钟，无菌水冲洗3～5次。然后将花药置MS＋4.0毫克/升(IAA)＋2.0毫克/升(KT)(pH5.8)的分化培养基中，在25(±1)℃温度、1500～2000勒克斯光强、10～12小时/天光照下培养。在分化培养基中培养20～30天后，花药分化出乳白色的愈伤组织，愈伤组织经转接(继代)或继续培养20～30天便分化出小植株。再经21～28天培养，即可长成2～3厘米的试管苗。最后取2～3厘米的无根试管苗置MS或1/2MS培养基中、或MS＋0.2毫克/升(IAA)或(IBA)JH43克/升(AC)(pH5.8)中诱导生根。生根苗炼苗7～10天后便可以移栽至腐殖质含量高的基质中，用MS培养液体浇透培养基，并用塑料薄膜或大烧杯罩上后置于温室内培育。
    4. 脱毒苗繁育
    将经检测完全无病毒的植株保存在用0.4～0.5厘米网眼的网纱构建的网室内，每品种保存10～20株，特别注意蚜虫(茎蚜、根蚜、桃蚜和棉蚜)的防治，其他技术同常规草莓繁殖与管理。
    5. 病毒种类
    目前，世界各国已报道的草莓病毒与类似病毒病害多达25种，中国已明确的有斑驳病毒、轻型黄边病毒、皱缩病毒、镶脉病毒、丛枝病毒、拟轻型黄边病毒和坏死病毒7种，其中斑驳病毒、轻型黄边病毒、皱缩病毒和镶脉病毒4种危害较重，是草莓脱毒的主要对象。
    6. 病毒检测
    采用各种技术获得脱毒苗后，其植株是否真正脱毒，必须经过严格的鉴定和检测，确认为无病毒存在，方可进行扩大繁殖，推广到生产上作为无毒苗应用。检测方法有多种:指示植物法；抗血清鉴定法；电子显微镜鉴定法；酶联免疫测定法和PCR法。
    诸方法有其各自的优缺点，其中较为先进的PCR法发展快速，以总核酸为模板多重RT～PCR检测体系兼有准确、简便、快速、低成本的优点，已逐渐被大家使用。在面临大量样品时，酶联法亦显示出独有的优势。


备注  《内蒙古农业科技》2014年04期